Peptide ACE 031

Trong quá trình tổng hợp pha rắn{0}}rắn, dễ xảy ra các tạp chất như thiếu peptit và peptit được chèn vào. Ví dụ: khi tổng hợp liên kết Gln-Asn, pH phản ứng (7,5-8,0) cần được kiểm soát để tránh chuyển vị asparagine. Bằng cách tối ưu hóa tác nhân ghép nối (chẳng hạn như sử dụng COMU thay vì HBTU), tỷ lệ sản phẩm phụ có thể giảm đáng kể.

ACE{2}}031 là peptit 24-và nguy cơ tích lũy sản phẩm phụ trong quá trình tổng hợp là tương đối cao. "Phương pháp ngưng tụ đoạn" (tức là tổng hợp 5{11}}10 đoạn peptit trước, sau đó kết nối chúng bằng phương pháp pha lỏng) có thể làm tăng tổng hiệu suất. Ví dụ: ACE{14}}031 được chia thành Ala-Trp-Arg (đoạn 1), Gln-Asn-Thr-Arg (đoạn 2), v.v. và mỗi mảnh được tổng hợp riêng biệt trước khi ghép nối.

Tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng: Sản phẩm hoàn thiện phải đạt các chỉ tiêu sau:

 Độ tinh khiết: Tỷ lệ phần trăm diện tích pic chính được HPLC phát hiện là Lớn hơn hoặc bằng 98% và tạp chất đơn lẻ Nhỏ hơn hoặc bằng 0,5%;

 Nội dung: Sai số phân tích thành phần axit amin Nhỏ hơn hoặc bằng ± 15%;

 Độ hòa tan: Dễ hòa tan trong nước hoặc DMSO, với nồng độ Lớn hơn hoặc bằng 10 mg/mL mà không kết tủa;

 Tính ổn định: Độ tinh khiết của ACE-031 không giảm quá 2% khi được bảo quản ở -20 độ trong 3 năm.

Trước tiên hãy thử sử dụng nước vô trùng hoặc PBS (pH 7,4). Nếu độ hòa tan không đủ, hãy điều chỉnh theo đặc tính của polypeptide. Đối với ACE-031, nếu chứa các axit amin cơ bản (như Arg, Lys), hãy thử axit axetic 10%-30%; nếu nó chứa axit amin có tính axit (như Asp, Glam), hãy sử dụng nước amoniac 13%. Ví dụ, trong một nghiên cứu nhất định, ACE-031 được hòa tan trong DMSO, sau đó pha loãng với PBS đến nồng độ mục tiêu để đảm bảo nồng độ DMSO cuối cùng dưới 1% nhằm tránh gây độc tế bào.

Trước khi hòa tan, khôi phục polypeptide về nhiệt độ phòng để tránh hấp thụ độ ẩm; cân nhanh sau khi mở nắp chai để giảm thời gian tiếp xúc; sử dụng sóng siêu âm hoặc gia nhiệt (Nhỏ hơn hoặc bằng 50 độ) để hỗ trợ hòa tan, nhưng tránh nhiệt độ cao gây biến tính; sau khi hòa tan, chia nhỏ và bảo quản để tránh đông lạnh và rã đông nhiều lần.

Lấy ví dụ tiêm bắp vào cơ hố sọ sau ở chuột làm ví dụ, ACE-031 được điều chế ở nồng độ 5 mg/kg trọng lượng cơ thể. Nếu trọng lượng trung bình của chuột là 20 g và thể tích liều lượng là 100 µL thì liều lượng cho một con chuột là=5 mg/kg × 0,02 kg=0.1 mg và nồng độ dung dịch làm việc là=0.1 mg/0,1 mL=1 mg/mL. Trong thí nghiệm thường phải chuẩn bị thêm số lượng vật nuôi gấp 1-2 lần để bù đắp thất thoát.

Trong mô hình phân biệt myotube C2C12, phạm vi nồng độ của ACE-031 là 10-100 nM. Ví dụ: chuẩn bị dung dịch làm việc 10 nM: Lấy 1 mg ACE-031 (trọng lượng phân tử 2956,49), hòa tan trong 1 mL DMSO để thu được dung dịch gốc 1 mM, sau đó pha loãng 100.000 lần với môi trường nuôi cấy đến 10 nM.