Bột Liraglutide CAS 204656-20-2

Bột liraglutide, Công thức phân tử C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, trọng lượng phân tử 1209.40. Nó là một glucagon được tổng hợp nhân tạo của con người như tương tự peptide-1 (GLP-1) với độ tương tự trình tự hơn 97% so với GLP-1 tự nhiên. Có thể được hòa tan trong nước, ethanol và propylene glycol. Vị trí lysine thứ 34 của phân tử GLP-1 tự nhiên được thay thế bằng arginine, không chỉ bảo tồn và kéo dài thời gian liên kết giữa các sản phẩm acyl hóa và protein, mà còn khắc phục đáng kể nhược điểm của sự suy giảm dễ dàng của GLP. Trong điều kiện lưu trữ bình thường, nó thể hiện sự ổn định tốt và dung dịch nước của nó có thể duy trì sự ổn định vật lý và hóa học trong ít nhất 2 năm.

Độc tính di truyền: kết quả của xét nghiệm AMES choBột liraglutide, xét nghiệm quang sai nhiễm sắc thể đối với các tế bào lympho máu ngoại vi ở người và xét nghiệm micronucleus chuột đều âm tính.

Độc tính sinh sản:

1. Chuột đực được tiêm dưới da 0,1, 0,25 và 1,0mg/kg/ngày của liraglutide 4 tuần trước khi giao phối và trong quá trình giao phối. Với liều 1,0mg/kg/ngày, khả năng sinh sản của động vật đực không bị ảnh hưởng trực tiếp. Theo tính toán AUC huyết tương, phơi nhiễm hệ thống được tạo ra bởi liều này xấp xỉ 11 lần so với phơi nhiễm ở người ở liều tối đa được khuyến nghị ở người (MRHD). Tiêm dưới da 1,0mg/kg vào chuột cái dẫn đến tăng tử vong phôi sớm, tăng cân có thể nhìn thấy và giảm lượng thức ăn.

2. Từ 2 tuần trước khi giao phối đến ngày thứ 17 của thai kỳ ở chuột cái, tiêm dưới da là 0,1, 0,25 và 1,0 mg/kg/ngày của liraglutide. Theo tính toán AUC huyết tương, phơi nhiễm hệ thống được tạo ra bởi ba liều này lần lượt là khoảng 0,8, 3 và 11 lần so với phơi nhiễm của con người theo MRHD. Trong nhóm liều 1mg/kg/d, số lượng tử vong phôi sớm tăng nhẹ. Ở tất cả các liều, các bất thường của thai nhi, các biến thể thận và mạch máu, hóa thạch không đều của hộp sọ, và một trạng thái hoàn toàn của hóa thạch quá mức đã được quan sát. Với liều 1,0mg/kg/ngày, gan đốm và xoắn sườn nhẹ đã được quan sát. Tỷ lệ dị tật của thai nhi vượt quá cùng thời kỳ và kiểm soát lịch sử là: dị tật và/hoặc hẹp ở cổ họng với liều 01mg/kg/d, và khiếm khuyết rốn với liều 0,1 và 0,25mg/kg/d.

Vào ngày thứ 6 đến 18 của thai kỳ, thỏ được tiêm liraglutide dưới da ở nồng độ 0,01, 0,025 và 0,05mg/kg/ngày. Theo tính toán AUC huyết tương, sự tiếp xúc với hệ thống của thỏ mang thai thấp hơn so với con người trong MRHD. Ở tất cả các liều, trọng lượng của thai nhi giảm và tỷ lệ mắc các bất thường của thai nhi nghiêm trọng tăng theo cách phụ thuộc vào liều. Liều 0,01mg/kg/ngày (thận, vai và xương lách), lớn hơn hoặc bằng 0,01mg/kg/d (mắt và chân trước), 0,025mg/kg/ngày 0,05mg/kg/d (xương parietal và các mạch máu lớn), tỷ lệ dị tật vượt quá các biện pháp kiểm soát đương thời và lịch sử. Sự hóa thạch không đều và/hoặc bất thường về xương được tìm thấy trong hộp sọ và cổ áo, đốt sống và xương sườn, xương ức, xương chậu, coccyx, và xương và xương lách; Ngoài ra còn có một biến thể bộ xương phụ thuộc liều nhẹ có thể nhìn thấy. Bất thường nội tạng được tìm thấy trong các mạch máu, phổi, gan và thực quản. Tất cả các nhóm điều trị cho thấy thùy kép hoặc phân nhánh của túi mật, nhưng không có tình huống tương tự nào được quan sát thấy trong nhóm đối chứng.

4. Trong khoảng thời gian từ ngày thứ 6 của thai kỳ đến khi cai sữa hoặc chấm dứt cho con bú vào ngày 24, chuột cái được tiêm dưới da với 0,1, 0,25 và 1,0 mg/kg/ngày của liraglutide. Theo tính toán AUC huyết tương, phơi nhiễm toàn thân là khoảng 0,8, 3 và 11 lần so với phơi nhiễm của con người trong MRHD. Thời gian sinh của hầu hết các động vật trong nhóm điều trị bị trì hoãn một chút. Trọng lượng trung bình của trẻ sơ sinh trong nhóm điều trị thấp hơn so với nhóm đối chứng. Chuột cái trong nhóm liều 1.0mg/kg/d biểu hiện mất máu và hành vi phấn khích trong quá trình sinh nở. Trọng lượng cơ thể trung bình của chuột F2 ở nhóm điều trị từ khi sinh đến ngày 14 sau khi sinh thấp hơn so với nhóm đối chứng, nhưng sự khác biệt giữa các nhóm không đạt được ý nghĩa thống kê.

Bột liraglutidelà một glucagon con người được tổng hợp nhân tạo như tương tự peptide-1 (GLP-1) với độ tương tự trình tự hơn 97% so với GLP-1 tự nhiên. Cấu trúc phân tử của liraglutide bao gồm các đặc điểm chính sau: Vị trí lysine thứ 34 của phân tử GLP-1 tự nhiên được thay thế bằng arginine, không chỉ bảo tồn và kéo dài thời gian liên kết giữa các sản phẩm acyl hóa và protein, mà còn vượt qua đáng kể sự bất lợi của GLP. Một chuỗi bên axit béo bổ sung đã được thêm vào lysine thứ 26, giúp kéo dài thời gian bán hủy của các sản phẩm acyl hóa in vivo. Những thay đổi phân tử độc đáo này đã làm cho delilaglutide cho thấy những tác động nổi bật trong điều trị lâm sàng, đặc biệt là trong bệnh tiểu đường và giảm cân.

Các phương pháp hóa học để tổng hợp liraglutide chủ yếu bao gồm các bước sau:

1. Tổng hợp mảnh

Thứ nhất, chia toàn bộ liraglutide thành nhiều phân đoạn, thường có thể được chia thành năm phân đoạn: axit amin thứ 1 đến thứ 4, axit amin thứ 5 đến thứ 10, axit amin thứ 11 đến 16, axit amin thứ 17 đến 24 và axit amin thứ 25 đến 31. Mỗi mảnh được tổng hợp riêng biệt, có thể làm giảm độ khó và chi phí tổng hợp peptide và cải thiện hiệu quả tổng hợp.

Đối với sự tổng hợp của từng mảnh, các phương pháp tổng hợp pha rắn hoặc tổng hợp pha lỏng thường được sử dụng. Phương pháp tổng hợp pha rắn liên quan đến việc kết nối các nhóm axit amin carboxyl với nhựa, sau đó thêm các axit amin vào nhựa theo trình tự, và cuối cùng cắt các peptide từ nhựa. Phương pháp tổng hợp pha lỏng liên quan đến việc hòa tan tất cả các axit amin trong một dung môi hữu cơ và sau đó ngưng tụ chúng theo trình tự để tạo thành các mảnh peptide.

2. Phản ứng khớp nối

Thực hiện phản ứng khớp nối trên 5 mảnh peptide được tổng hợp trong bước 1 để tạo thành một liraglutide hoàn chỉnh. Phản ứng ghép có thể được thực hiện bằng cách sử dụng các tác nhân ghép hóa học hoặc sinh học, và phương pháp cụ thể có thể được chọn theo nhu cầu thực tế.

Trong phản ứng khớp nối, cần phải kết nối nhóm amino của mỗi mảnh với nhóm carboxyl của đoạn tiếp theo. Để đạt được điều này, thường cần sử dụng các tác nhân ngưng tụ như DIC hoặc BOP. Các tác nhân ngưng tụ này có thể thúc đẩy phản ứng giữa các nhóm amino và carboxyl, tạo thành liên kết peptide. Trong phản ứng ghép, cũng cần chú ý để kiểm soát các điều kiện phản ứng, chẳng hạn như nhiệt độ, giá trị pH và thời gian phản ứng, để đảm bảo tiến trình trơn tru của phản ứng.

3. Tinh chế và nhận dạng

Liraglutide tổng hợp cần được tinh chế và xác định để đảm bảo độ tinh khiết và chất lượng của sản phẩm. Tinh chế thường được thực hiện bằng các phương pháp như sắc ký lỏng hiệu suất cao (HPLC) hoặc điện di, sau đó xác định bằng phương pháp quang phổ khối, cộng hưởng từ hạt nhân và các phương pháp khác. Thông qua các phương tiện này, có thể đảm bảo rằng trọng lượng và trình tự phân tử của sản phẩm tổng hợp phù hợp với kỳ vọng, và không có tạp chất hoặc dư lượng sản phẩm phụ.

4. Sửa đổi khác

Ngoài các bước trên, đôi khi các sửa đổi khác được yêu cầu, chẳng hạn như thêm hoặc loại bỏ các nhóm bảo vệ. Các bước này cũng rất cần thiết vì chúng có thể bảo vệ các nhóm hoạt động trong các peptide khỏi bị phá hủy hoặc phản ứng phụ xảy ra, cải thiện chất lượng và năng suất tổng hợpBột liraglutide.

Trên đây là các phương pháp hóa học chính để tổng hợp liraglutide, nhưng tất nhiên, một số chi tiết và kỹ thuật cần được ghi nhận trong hoạt động thực tế. Ví dụ, chọn hệ thống dung môi thích hợp, kiểm soát nhiệt độ và pH và sử dụng các chất xúc tác thích hợp đều có thể ảnh hưởng đến hiệu quả tổng hợp và chất lượng sản phẩm. Do đó, trong hoạt động thực tế, các điều chỉnh và tối ưu hóa cần được thực hiện theo các trường hợp cụ thể.

Liraglutide (một chất chủ vận thụ thể GLP-1 tác dụng lâu dài) đóng một vai trò quan trọng trong điều trị bệnh tiểu đường. Để đảm bảo khả năng kiểm soát chất lượng của nó, cần thiết lập các phương pháp phân tích khoa học và nghiêm ngặt, và tiến hành xác nhận có hệ thống để đảm bảo độ tin cậy của các phương pháp này. Các phân tích sau đây được thực hiện từ ba khía cạnh: các mục xác nhận, phương pháp xác nhận và các điểm kiểm soát chính.

Các mục xác minh cốt lõi và các yêu cầu kỹ thuật

Tính đặc hiệu

Mục tiêu: Để chứng minh rằng phương pháp này có thể phân biệt liraglutide với tạp chất, sản phẩm suy thoái và tá dược.

Chiến lược thực hiện:

Sắc ký: Sử dụng HPLC-UV hoặc UPLC-MS. Thông qua các xét nghiệm suy thoái bắt buộc (như nhiệt độ cao, phơi nhiễm ánh sáng, thủy phân axit-bazơ), tạo ra các sản phẩm thoái hóa và xác minh mức độ phân tách của đỉnh chính và đỉnh tạp chất (lớn hơn hoặc bằng 1,5). Ví dụ, trong nghiên cứu về mô hình chuột APOE-/-, sau khi liraglutide bị oxy hóa, các sản phẩm thoái hóa (như chất gây nghiện axit formic) cần được xác nhận bằng phân tích sắc ký để đảm bảo hiệu ứng phân tách của các sản phẩm thoái hóa từ đỉnh chính.

Quang phổ: Sử dụng máy dò PDA để so sánh phổ UV của đỉnh chính và tạp chất, và xác nhận độ tinh khiết của các đỉnh.

Kiểm soát trống: Xác minh sự vắng mặt của các tín hiệu dương tính giả bằng các mẫu mà không có liraglutide (như dung dịch tá dược).

 

Sự chính xác

Mục tiêu: Để đảm bảo rằng các kết quả đo được gần với giá trị thực và tốc độ phục hồi được kiểm soát trong phạm vi 98% - 102%.

Chiến lược thực hiện:

Kiểm tra phục hồi bổ sung tiêu chuẩn: Thêm một lượng chất tham chiếu đã biết vào một mẫu có hàm lượng liraglutide đã biết và đo tốc độ phục hồi. Ví dụ, trong phân tích công thức, thêm 0,5 mg/ml, 1,0 mg/ml và 1,5 mg/ml liraglutide vào dung dịch tá dược trống, lặp lại mỗi nồng độ 3 lần và tính tốc độ thu hồi trung bình.

Phương pháp so sánh: So sánh với các phương pháp cổ điển (như chuẩn độ) hoặc phương pháp được xác minh (như phương pháp dược phẩm) và độ lệch kết quả phải nhỏ hơn hoặc bằng 2%.

 

Độ chính xác

Mục tiêu: Để đánh giá mức độ gần gũi của kết quả đo lặp đi lặp lại, với RSD nhỏ hơn hoặc bằng 2%.

Chiến lược thực hiện:

Độ lặp lại: Tiến hành 6 phép đo liên tiếp của cùng một mẫu bởi cùng một nhà phân tích, cùng một công cụ và cùng một lô mẫu và tính toán RSD.

Độ chính xác trung gian: Tính RSD bằng cách xác định cùng một lô mẫu bằng các nhà phân tích khác nhau, các công cụ khác nhau và các ngày khác nhau. Ví dụ, trong việc xác định hàm lượng liraglutide, RSD độ lặp lại phải nhỏ hơn hoặc bằng 1,5%và RSD chính xác trung gian phải nhỏ hơn hoặc bằng 2,0%.

Khả năng tái tạo: Xác minh hợp tác bởi nhiều phòng thí nghiệm (như phương pháp tiêu chuẩn dược điển), RSD nên tuân thủ các nguyên tắc hướng dẫn.

 

Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng

Mục tiêu: Để xác định nồng độ tối thiểu mà phương pháp có thể phát hiện và định lượng liraglutide.

Chiến lược thực hiện:

Phương pháp tỷ lệ tín hiệu-nhiễu: Xác định LOD với tỷ lệ nhiễu tín hiệu 3: 1 và xác định LOQ với tỷ lệ nhiễu tín hiệu 10: 1. Ví dụ, trong phương pháp HPLC-UV, LOD của liraglutide có thể thấp tới 0,01 ug/mL và LOQ là 0,05 ug/mL.

Phương pháp đường cong tiêu chuẩn: Tính toán LOD và LOQ bằng cách sử dụng tín hiệu phản hồi của các chất tiêu chuẩn tập trung thấp (chẳng hạn như 0,1 UG/mL - 1 ug/ml).

 

Tuyến tính

Mục tiêu: Để chứng minh rằng tín hiệu đáp ứng tỷ lệ thuận với nồng độ, với R² lớn hơn hoặc bằng 0,999.

Chiến lược thực hiện:

Kiểm tra nồng độ độ dốc: Chuẩn bị độ dốc nồng độ 5-7 (chẳng hạn như 0,1 mg/ml - 2.0 mg/ml) của các dung dịch tiêu chuẩn, đo diện tích cực đại hoặc giá trị đáp ứng và vẽ đường cong tiêu chuẩn.

Phân tích dư: Kiểm tra xem phần dư được phân phối ngẫu nhiên và không có độ lệch có hệ thống.

 

Phạm vi

Mục tiêu: Để xác định phạm vi nồng độ áp dụng của phương pháp, thường là 120% LOQ đến giới hạn trên của tuyến tính.

Chiến lược thực hiện:

Xác định nội dung: Phạm vi được đặt ở mức 80% - 120% số lượng được dán nhãn. Ví dụ: phạm vi xác định nội dung của công thức liraglutide phải là 0,4 mg/ml - 1.2 mg/ml. Kiểm soát tạp chất: Theo hướng dẫn ICH Q3D, đặt phạm vi giới hạn của tạp chất (ví dụ: tạp chất đơn lẻ nhỏ hơn hoặc bằng 0,5%, tổng tạp chất nhỏ hơn hoặc bằng 2,0%).

Tài liệu xác nhận và quản lý dữ liệu

01

Kế hoạch và báo cáo xác nhận

Xác định rõ ràng các mục xác thực, phương pháp, tiêu chuẩn chấp nhận và quy trình xử lý bất thường. Ví dụ: nếu RSD chính xác vượt quá giới hạn, cần phải điều tra các lỗi của công cụ hoặc lỗi hoạt động.

Ghi lại dữ liệu gốc (như sắc ký đồ, đường cong tiêu chuẩn, bảng tính tốc độ phục hồi) để đảm bảo truy xuất nguồn gốc.

02

Phát triển phương pháp chỉ định ổn định

Đối với các xét nghiệm suy thoái bắt buộc, nó nên bao gồm quá trình oxy hóa, tiếp xúc với ánh sáng, thủy phân, v.v., để mô phỏng các điều kiện lưu trữ thực tế. Ví dụ, Liraglutide được đặt ở 60 độ trong 48 giờ, tỷ lệ suy giảm phải lớn hơn hoặc bằng 10% để xác minh khả năng phát hiện các sản phẩm suy thoái của phương pháp.

03

Tuân thủ quy định

Theo ICH Q2 (R2), USP<1225>và hướng dẫn GMP của Trung Quốc để đảm bảo rằng các mục xác nhận bao gồm các chỉ số cốt lõi như tính đặc hiệu và độ chính xác.

Để phân tích tạp chất nguyên tố, nó phải tuân thủ ICH Q3D và USP<233>Yêu cầu, kiểm soát các giới hạn của các yếu tố 1 lớp như AS, CD và PB.

Chú phổ biến: Liraglutide Powder CAS 204656-20-2, nhà cung cấp, nhà sản xuất, nhà máy, bán buôn, mua, giá, số lượng lớn, để bán